Agar para Legionella – Formulaciones de Agar

El agar LB de Miller se utiliza en estudios genéticos moleculares en un entorno de laboratorio. El agar LB de Miller no está destinado a ser utilizado en el diagnóstico de enfermedades u otras condiciones en humanos. El agar LB de Miller, un medio nutricionalmente rico diseñado para el crecimiento de cultivos puros de cepas recombinantes, se basa en la formulación descrita por Miller. E. coli crece en fase exponencial tardía en el medio LB. Algunos vectores plásmidos se replican a un número alto de copias y no requieren amplificación selectiva. Algunos vectores no se replican tan libremente y necesitan ser amplificados selectivamente. El cloranfenicol puede añadirse para inhibir la síntesis del huésped y prevenir la replicación del cromosoma bacteriano. El agar LB de Miller contiene 10 g/L de cloruro de sodio, diferente a los niveles en las formulaciones de Lennox. Esto le permite al investigador seleccionar la concentración óptima de sal para una cepa específica. Este medio puede suplementarse asépticamente con glucosa.

 

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Descripción:

El agar para Legionella se utiliza para el aislamiento de Legionella spp. en un entorno de laboratorio. El agar para Legionella no está destinado a ser utilizado en el diagnóstico de enfermedades u otras condiciones en humanos. En 1977, McDade et al. identificó Legionella pneumophila como el agente causante de la enfermedad del legionario, una enfermedad multisistémica que se manifiesta principalmente por neumonía. En 1978 un nuevo medio, el agar F-G, dio como resultado un crecimiento mejorado de L. pneumophila, un organismo muy exigente en sus requerimientos culturales. Freely et al. modificó el agar F-C sustituyendo el extracto de levadura como una fuente de vitamina y reemplazando el almidón con carbón activado, produciendo agar de carbón y extracto de levadura (CYE). En 1980, Pasculle et al. reportó que el agar CYE podría mejorarse mediante la adición del buffer ACES (ácido N-2-acetamido2-aminoetano sulfónico). Un año después, Edelstein aumentó aún más la sensibilidad del medio añadiendo sal de potasio del ácido alfa-cetoglutárico.

Modo de uso:

  1. Suspenda 37 g del medio en un litro de agua purificada.
  2. Ajuste el pH a 6.8 – 6.9 con KOH 1N.
  3.  NO caliente antes de la esterilización.
  4. Autoclave a 121°C durante 15 minutos. Enfríe a 45 – 50°C.
  5. Añada asépticamente 10 mL de una solución estéril de L-Cisteína (4%) y pirofosfato férrico (2.5%).
  6. Mezcle y determine el pH. Si es necesario, ajuste asépticamente el pH a 6.85 – 7.0 con una solución esterilizada de HCl 1N o KOH 1N. Si es necesario, añada soluciones inhibidoras.
  7. Dispense con agitación

Resultados: Legionella pneumophila produce colonias pequeñas a grandes, lisas, incoloras a pálidas, gris azuladas, ligeramente mucoides que emiten fluorescencia de color amarillo verdoso bajo luz ultravioleta de onda larga. Se debe realizar una tinción de Gram, pruebas bioquímicas y procedimientos serológicos para la confirmación de L. pneumophila

Almacenamiento y vida útil: Almacene la botella sellada que contiene el medio deshidratado a 2 – 30 ° C. Una vez abierto y tapado, coloque el recipiente en un ambiente de baja humedad a la misma temperatura de almacenamiento. Proteja de la humedad y la luz manteniendo el recipiente bien cerrado.

Industrias en que se utiliza:

Procesamiento de alimentos, bebidas y productos cosméticos

Especificaciones:

cificaciones:
Matriz: Superficies y alimentos.
Apariencia
deshidratada: Polvo homogéneo de flujo libre, y de color beige a gris – negro.
Aspecto preparado: El medio preparado es ligeramente brumoso y color negro y opaco.
Respuesta cultural
esperada: Respuesta cultural en el medio, incubado aeróbicamente bajo 7 – 10% de
CO2 a 35 ± 2 °C, y examinado luego de 72 – 96 horas.
Contenido: Frasco de 5 kg

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